遵循顯微鏡設(shè)計須符合樣品要求的原則,創(chuàng)建了一套完全模塊化的成像平臺,可以滿足多種實驗需求。與傳統(tǒng)的研究技術(shù)(例如使用微電極)相比,我們的多光子成像系統(tǒng)能夠以更快速度、更大深度和更高強度同時讀出和操縱神經(jīng)元群。我們開發(fā)了一個旋轉(zhuǎn)主體,使顯微鏡可繞樣品旋轉(zhuǎn)。我們還提供各種剛性主體,其具7.74英寸高度,可圍繞物鏡提供較大的三維工作空間。
神經(jīng)元活動的體內(nèi)體積成像需要亞微米級空間分辨率和毫秒級時間分辨率。傳統(tǒng)方法通過連續(xù)掃描衍射高斯光束以創(chuàng)建3D圖像,而基于貝塞爾光束的多光子成像依靠軸向延伸的焦點來捕獲體積圖像。激發(fā)光束的擴展景深可創(chuàng)建3D體積的2D投影,從而有效地將2D幀速率轉(zhuǎn)換為3D體積速率。
三光子激發(fā)非常適合深層組織成像,且需要高脈沖能量激發(fā)源,通常在1300 nm或1700 nm附近。與雙光子成像相比,三光子成像可減少組織散射并降低離焦背景,從而提高信噪比。
Thorlabs的空間光調(diào)制器(SLM)使用全息圖案來同時刺激樣品中多個位置的光活化。SLM設(shè)計用于通過飛秒脈沖進行雙光子激發(fā),SLM可控制激勵激光束輪廓上的相位以生成數(shù)百個用戶確定的焦點。